SEC-MALS多角度激光光散射系统
可表征的物质:
• 多肽和蛋白
• 蛋白偶联物/复合物
• 高分子和共聚物
• 纳米颗粒
• 类病毒颗粒
• 脂质体和外泌体
DAWN
多角度光散射检测器的重要成员
•18角度激光光散射仪(DAWN): 灵敏度高、检测范围广
•3角度激光光散射仪(miniDAWN ): 适合一定分子量范围的蛋白和高分子
•microDAWN: 为UHPLC设计
怀雅特的多角度光散射检测器可兼容任何的:
• GPC/HPLC/UHPLC/APC:安捷伦(Agilent)、沃特世(Waters)、岛津(Shimadzu)、热电(Thermo)等
• 蛋白纯化系统:GE (AKTA )、Bio-rad等
A1:D20A5A1:D20 | DAWN | miniDAWN | microDAWN |
简介 | 18角度光散射 | 3角度光散射 | UHPLC/APC设计的 |
多角度光散射 | |||
应用 | 多肽、 蛋白、 聚合物; 病毒、 囊泡和纳米颗粒 | ||
分子量测定范围 | 200 ~ 1×109 Da | 蛋白(200 ~ 1×107 Da) | |
聚合物(200 ~ 10×106 Da) | |||
分子尺寸范围(MALS-rg) | 10 ~ 500+ nm | 10 ~ 50+ nm | 10 ~ 50+ nm |
分子尺寸范围(DLS-rh) | 联用模式: 0.5 ~ 300 nm* | 联用模式: 0.5 ~ 50 nm | 联用模式: 0.5 ~ 30 nm |
单机模式: 0.5 nm ~ 1μm | 单机模式: 0.5 nm ~ 1 μm | 单机模式: 0.5 nm ~ 1 μm | |
兼容性 | HPLC | HPLC | UPHLC/APC |
流通池 | 标准和高温流通池 | 标准流通池 | 微型流通池 |
内置COMET自清洗模块 | 内置COMET自清洗模块 | ||
检测器 | 18角 | 3角 | 3角 |
MALS 灵敏度: | 0.2 μg | 0.5 μg | 70 ng |
水相缓冲液中的BSA | |||
MALS灵敏度: | 10 ng | 25 ng | 3.5 ng |
THF中100 KDa的PS | |||
温度控制 | 常温型 | 常温型 | 常温型 |
制冷/加热型: -15 ~ 150 ℃ | |||
超高温型: 20 ℃ ~ 210 ℃ | |||
选件 | 温度控制 | WyattQELS 动态光散射; | WyattQELS 动态光散射 |
荧光过滤 | |||
WyattQELS 动态光散射 |
示差折光检测器
示差折光检测技术是一种通用的浓度测定技术,不受样品中发色基团或荧光吸收基团的影响。
Optilab示差折光检测器主要用于:
• MALS分析中的分子量测定
• 特性粘度测定表征高分子构象和支化度
• 三检测器表征共聚物和蛋白偶联物
• 色谱峰的基本定量
• 测定样品的dn/dc
• 测定溶剂的绝对折射率
一款可与MALS检测器在相同波长下独立测定dn/dc的仪器,Optilab系列适用于不同的应用领域,并且可以测定溶剂绝对折射率。
Optilab | Optilab HC | microOptilab | |
简介 | 适用于标准HPLC,拥有超 | 适用于CG-MALS蛋白纯化 | 适用于UHPLC,拥有超 |
高的灵敏度和动态范围 | 和其它的高浓度测定分析 | 高灵敏度和动态范围 | |
应用 | 测定范围可低至20ng/mL | 测定蛋白,浓度测定上限 | UHPLC/APC |
可达180mg/mL | |||
dRI测定范围 | -0.0047 ~ +0.0047 | -0.0026 ~ +0.034 | -0.0047 ~ +0.0047 |
(折射率单位 RIU) | |||
动态范围 | 12,000,000 : 1 | 23,000,000 : 1 | 6,000,000 : 1 |
dRI灵敏度 | 0.75x10-9 RIU | 1.5x10-9 RIU | 1.5x10-9 RIU |
aRI测定范围 | 1.2 ~ 1.8 | 1.2 ~ 1.8 | 1.2 ~ 1.8 |
aRI灵敏度 | ±0.002 | ±0.002 | ±0.002 |
温度控制 | 4 ℃ ~ 65 ℃ | 4 ℃ ~ 65 ℃ | 4 ℃ ~ 65 ℃ |
控温技术 | 帕尔贴自动热调谐 | 帕尔贴自动热调谐 |
脉冲抑制 | 毛细管桥脉冲补偿元件 | 毛细管桥脉冲补偿元件 |
延迟柱规格 | 标准体积为16.2 mL | 5.4 mL |
可选体积为8.1, 5.4 或者 2.7 mL |
SEC-MALS 应用
聚集体和碎片
UHPLC能够分离聚集体和片段,与MALS结合,可准确识别IgG样品中的少量碎片,放大100倍的插图中显示尽管每个聚集峰占单体总质量的百分之一, 但它们仍可被μSEC-MALS准确分析和识别。
低分子量高分子和多肽
亚甲基二苯基4,4'-二异氰酸酯 (MDI) 分子量只有250 Da,在THF中极易形成低聚物, 对于表征极小分子量的MDI分子,超高灵敏度的HELEOS和TREOS是必不可少的重要工具。
聚集体和碎片蛋白偶联物和共聚高分子分析
ASTRA的蛋白偶联物分析方法使用MALS、UV和RI检测器的数据来表征蛋白偶联物和共聚物。该方法可以测定蛋白、修饰物和偶联物的分子量,以及偶联物的平均消光系数和dn/dc。
蛋白复合物和构象
尽管IL4 trap分子量较低, 但是它却早于复合物IL4 trap:IL4 被洗脱出来。MALS中的MW分析(红色符号)表明MW值符合预期、在线DLS 的rh数据(蓝色空心符号)解释了复合物IL4-trap:IL4 较晚洗脱的原因:IL4与IL4-tarp复合后构象发生了变化,复合物的结构更紧凑。